?

1??????????目的

建立無菌室浮游菌測試標準操作程序，規(guī)范無菌室浮游菌的檢測。

2??????????范圍

適用于無菌室（包括潔凈工作臺）浮游菌的測試和環(huán)境驗證。

3??????????職責

QA、QC人員遵照執(zhí)行。

4??????????內(nèi)容

4.1????參考標準：GB/T 16293-2010

4.2????測試方法

本測試方法為計數(shù)濃度法，即通過收集懸浮在空氣中的生物性粒子于專門的培養(yǎng)基（選擇能證實其能夠支持微生物生長的培養(yǎng)基），經(jīng)若干時間和適宜的生長條件讓其繁殖到可見的菌落計數(shù)，以判定該無菌室的微生物濃度。

4.3????測試儀器、輔助設備和培養(yǎng)基

浮游菌采樣器、培養(yǎng)皿（選用與儀器相適應的培養(yǎng)皿）、培養(yǎng)基、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器。

4.4????測試狀態(tài)及測試時間

4.4.1???靜態(tài)和動態(tài)兩種狀態(tài)均可進行測試，靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于2人。

4.4.2???在靜態(tài)a測試時，單向流無菌室（區(qū)），測試在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行時間不少于10分鐘后開始；非單向流無菌室（區(qū)），測試在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于30分鐘后開始。在靜態(tài)b測試時，單向流無菌室（區(qū)），測試在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過10分鐘自凈后開始；非單向流無菌室（區(qū)），測試在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過20分鐘自凈后開始。

4.5????采樣點的確定

4.5.1???最少采樣點數(shù)目見表1，每次最小采樣量見表2。

表1?最少采樣點數(shù)目

?

表2?最小采樣量

?

4.5.2???采樣點位置布置宜力求均勻，避免采樣點在局部區(qū)域過于稀疏，采樣點按照《潔凈區(qū)環(huán)境監(jiān)控管理規(guī)程》附件×××車間潔凈度監(jiān)測采樣點布局圖的要求布置，每個采樣點一般采樣一次。

4.5.3???工作區(qū)采樣點位置離地0.8m~1.5m左右（略高于工作面），送風口測點位置離開送風面30cm左右，可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加測點。

4.6????測試準備

4.6.1???采樣器在進入被測區(qū)域前先清潔表面，然后用75%酒精消毒一遍或存放于被測區(qū)域內(nèi)，與被測試區(qū)域一起消毒（用于A級無菌室的采樣器必須預先放在被測房間內(nèi)）。

4.6.2???A/B級區(qū)采用一次性培養(yǎng)皿，其它區(qū)域按無菌操作要求，在中檢室潔凈工作臺上提前制備培養(yǎng)備用（將滅菌后的培養(yǎng)基用水浴溶解，冷卻至約50-60℃，Φ90mm培養(yǎng)皿每個傾注約20ml培養(yǎng)基，Φ150mm培每個傾注約30ml培養(yǎng)基），培養(yǎng)皿加蓋后在室溫下放至凝固。自制好的培養(yǎng)皿在無菌室內(nèi)存放不超過48小時，2~8℃保存的培養(yǎng)皿一般不超過1周，一次性培養(yǎng)皿在標注的有效期內(nèi)使用，過期不得使用。

4.6.3???A/B級區(qū)使用的培養(yǎng)皿在區(qū)域消毒前一次性傳入，隨環(huán)境一起消毒，在消毒液取用間架子上暫存，在有效期內(nèi)使用。若需臨時傳入，則必須在前一天臭氧消毒前通過C級與B級傳遞窗傳入B級區(qū)進行臭氧消毒，第二天使用。傳入前表面也必須用75%酒精擦拭。其它區(qū)域用培養(yǎng)皿按物品傳入要求當天傳入使用。

4.6.4???采樣前，先用75%酒精清洗采樣器的頂蓋、轉盤以及罩子的內(nèi)外面（FKC型浮游空氣塵菌采樣器用酒精清洗采樣頭）。

4.6.5???測試具體操作見“JYQ-Ⅱ型浮游菌采樣器標準操作程序或FKC-1型浮游空氣塵菌采樣器標準操作程序”。

4.6.6???采樣結束后，蓋上培養(yǎng)皿蓋子，在培養(yǎng)皿上標注所有信息（包括產(chǎn)品批號，放置位置等），將培養(yǎng)皿用適宜的方式捆扎，倒置于30~35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)時間不少于2天。

4.6.7???培養(yǎng)結束后逐個檢查培養(yǎng)皿，用肉眼對培養(yǎng)皿上所有的菌落直接計數(shù)、標記，然后用5~10倍放大鏡檢查，有否遺漏。若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。

4.7????測試記錄應包含以下內(nèi)容

4.7.1 ?被測試區(qū)域名稱、測試日期、測試依據(jù)、測試者姓名、測試儀器及測試方法的描述，測試時所采用的狀態(tài)和室內(nèi)測試人員數(shù)，采樣點數(shù)目，測試次數(shù)、采樣流量，測試結果（包括所有統(tǒng)計計算資料）等。

4.7.2 ?若為動態(tài)測試，還應記錄現(xiàn)場操作人員數(shù)量，現(xiàn)場設備運轉情況等。

4.8????結果計算

4.8.1???用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。

4.8.2???每個測點的浮游菌平均濃度計算按下式進行

4.9????結果評定

4.9.1???每個測點的浮游菌平均濃度必須低于所選定評定標準中的界限。

4.9.2???在靜態(tài)測試時，若某測點的浮游菌平均菌濃度超過評定標準，則應重新采樣兩次，兩次測試結果均合格才能判為符合。

4.9.3???若有超過規(guī)定者，必須及時與生產(chǎn)部門聯(lián)系，對該區(qū)域進行消毒或其它處理，然后重新測試至合格。

4.10?日常監(jiān)控

4.10.1 ?浮游菌日常監(jiān)控設糾偏限度和警戒限度（限度范圍及取樣頻次見《潔凈區(qū)環(huán)境監(jiān)控管理規(guī)程》），以保證無菌室（區(qū)）的微生物濃度受到控制，定期檢測以檢查微生物負荷以及消毒劑的效力，并作傾向分析。靜態(tài)和動態(tài)的監(jiān)控都可以采用該方法。

4.10.2 ?對于浮游菌的取樣頻次，如果出現(xiàn)下列情況應考慮修改，在評估以下情況后，也應確定其他項目的檢測頻次

——連續(xù)超過糾偏限度和警戒限度；

——停工時間比預計延長；

——關鍵區(qū)域內(nèi)發(fā)現(xiàn)有污染存在；

——在生產(chǎn)期間，空氣凈化系統(tǒng)進行任何重大的維修；

——日常操作記錄反映出傾向性的數(shù)據(jù)；

——消毒規(guī)程的改變；

——引起生物污染的事故等；

——當生產(chǎn)設備有重大維修或增加設備時；

——當無菌室（區(qū)）結構或區(qū)域分布有重大變動時。

4.11?注意事項

4.11.1?????JYQ-Ⅱ型浮游菌采樣器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開啟浮游菌采樣器，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時間不少于5分鐘，檢查流量并根據(jù)采樣量調(diào)整設定采樣時間。

4.11.2?????單向流無菌室（區(qū)）或送風口，采樣器采樣口朝向應正對氣流方向，非單向流無菌室（區(qū)），采樣口向上。

4.11.3?????測試時必須穿著與被測區(qū)域潔凈度級別要求相適應并經(jīng)高壓滅菌后的無菌服。

4.11.4?????布置采樣點時，至少應盡量避開塵粒較集中的回風口。

4.11.5?????采樣結束，需用75%酒精噴射采樣器罩子的內(nèi)壁和轉盤（FKC型浮游空氣塵菌采樣器噴射采樣頭和保護蓋）。

4.11.6?????應采取一切措施防止采樣過程的污染和其他可能對樣本的污染。

4.11.7?????每批培養(yǎng)基應有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染，可每批選定3只培養(yǎng)皿作為對照培養(yǎng)；培養(yǎng)皿在用于檢測時，為避免培養(yǎng)皿運輸或搬動過程造成的影響，宜同時進行對照試驗，每次或每個區(qū)域取1個對照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿一起放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，結果應無菌落生長。

4.11.8?????采樣前應仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質量，如發(fā)現(xiàn)變質、破損或污染的應剔除。

4.11.9?????由于細菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落或培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。

4.11.10??必須定期對恒溫培養(yǎng)箱進行校驗。

5??????????相關文件

6??????????附件

無

7??????????變更歷史